| ? | ||||||||||||
|
||||||||||||
 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
| 購(gòu)買(mǎi)進(jìn)口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 www.hcnanjing.cn |
細(xì)胞養(yǎng)著養(yǎng)著就要放長(zhǎng)假了，怎么辦？ 細(xì)胞傳代多了，目前用不了這么多，又不能扔，怎么辦？ 那么，很多時(shí)候，我們需要把細(xì)胞冷凍起來(lái)，以便于長(zhǎng)期保存，以備不時(shí)之需。而復(fù)蘇，就是再次需要細(xì)胞的時(shí)候，把冷凍的細(xì)胞蘇醒過(guò)來(lái)，恢復(fù)活力。
凍存細(xì)胞一般常用胎牛血清（FBS)和二甲基亞砜（DMSO）。血清是維持細(xì)胞生存環(huán)境；DMSO是冷凍保護(hù)劑，使細(xì)胞免受低溫冰晶形成、及滲透壓改變而導(dǎo)致的物理?yè)p傷； 細(xì)胞培養(yǎng)書(shū)上基本上建議的是兩種：70%培養(yǎng)基 + 10%DMSO+ 20%胎牛血清或者10%DMSO+ 90%胎牛血清 。 但經(jīng)過(guò)有些實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)："10%的DMSO，90%的血清"復(fù)蘇效果相對(duì)比"70%培養(yǎng)基 + 10%DMSO+ 20%血清"好。 MP Biomedicals二甲基亞砜（DMSO）可用于細(xì)胞、組織和器官的冷凍保護(hù)劑，保護(hù)細(xì)胞免受冰晶引起的機(jī)械性損傷；可用于原代、傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，重組細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞，胚胎干細(xì)胞、造血干細(xì)胞的凍存。（貨號(hào)：0219605590，規(guī)格：500mL）
那么凍存和復(fù)蘇細(xì)胞需要注意什么呢？且往下看！
一 細(xì)胞本身狀態(tài) 一般情況下細(xì)胞的復(fù)蘇還與原代細(xì)胞的活性有關(guān)，如果要凍存的細(xì)胞懸液本身活性不高的話，后面復(fù)蘇的存活率也不高。
二 慢凍快融 一般情況下，細(xì)胞凍存時(shí)要遵循“慢凍快融”的原則。標(biāo)準(zhǔn)的降溫速度是1-2℃/min ，當(dāng)溫度到達(dá)-25℃，降溫速度可加快至5-10℃/min，到-80℃可直接入液氮。有些實(shí)驗(yàn)室是梯度凍存：4度，-20，-80，液氮，依次凍存。而復(fù)蘇速度越快越好。從液氮罐里取出來(lái)之后，迅速放在37°C水浴中，盡快融化。
三 安全第一 凡是和液氮接觸的操作，注意戴保護(hù)眼鏡和手套。注意：復(fù)蘇的時(shí)候，在水浴中搖搖動(dòng)的時(shí)候會(huì)有爆炸的可能性。另外， DMSO是有毒致癌的。接觸的時(shí)候一務(wù)必要帶好手套。
四 DMSO是否要去除 上面提到了DMSO是一種有毒致癌物質(zhì)。那么，解凍之后，應(yīng)不應(yīng)該去除凍存液中的DMSO呢？答案是no。除了極少數(shù)特別注明的對(duì)DMSO敏感的細(xì)胞外，99%的細(xì)胞都不需要去除DMSO。后面細(xì)胞培養(yǎng)中頻繁換液會(huì)慢慢去除掉DMSO。
|
購(gòu)買(mǎi)進(jìn)口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物
www.hcnanjing.cn |
|
